Verificação do efeito de esterilização de autoclave

Um dos instrumentos de laboratório essencial em um laboratório de microbiologia é o esterilizador, sendo as autoclaves o tipo mais comumente usado. De acordo com o GB 4789.1-2016, o equipamento de laboratório deve ser inspecionado regularmente e/ou calibrado (com rotulagem apropriado), mantido e atendido para garantir o desempenho e a segurança operacionais. Mas seu esterilizador sofre inspeções semelhantes? Se essa validação for necessária, como deve ser conduzida?

Hoje, resumiremos os principais aspectos da validação de eficácia da esterilização para autoclaves.

Os métodos comuns para validar a eficácia da esterilização da autoclave incluem o método do indicador químico, o método do termômetro de ponto fixo, o método da sonda de temperatura feita por si e o método do indicador biológico. Os princípios por trás desses métodos são semelhantes, concentrando -se principalmente em verificar se a temperatura dentro do esterilizador atinge o nível necessário durante a esterilização. Dependendo das condições específicas do laboratório, um ou vários métodos podem ser selecionados para validação.

1. Método do Indicador Químico
Princípio: Os indicadores químicos sofrem mudança de cor ou deformação quando expostos a uma temperatura e duração específicas, permitindo a avaliação de se os parâmetros de esterilização foram atendidos.

Um indicador comumente usado nos laboratórios é a fita indicadora de autoclave 3M, que muda de cor antes e após a esterilização para indicar eficácia. Esta fita é feita com produtos químicos sensíveis ao calor e agentes de desenvolvimento de cores impressos em listras em uma fita adesiva especial. A fita deve ser aplicada à parte externa do pacote, com um comprimento mínimo de 5 cm, e pressionado firmemente para obter uma melhor adesão e vedação. Após a esterilização a 121 ° C por 20 minutos ou 130 ° C por 4 minutos, as listras brancas diagonais na fita ficarão completamente pretas. Se a mudança de cor for desigual ou incompleta, o pacote pode não ter atendido às condições de esterilização.

2. Método do termômetro de ponto fixo
Princípio: Este método usa um termômetro de mercúrio que retém a temperatura mais alta alcançada, semelhante a um termômetro clínico tradicional. Ajuda a determinar a temperatura máxima alcançada dentro da autoclave durante a esterilização.

Para validação, um termômetro de mercúrio é colocado dentro de um grande frasco cônico cheio de água. Durante a esterilização, o balão é posicionado nas seções superior e inferior da autoclave. Após a esterilização, a leitura do termômetro é verificada na temperatura necessária. No entanto, esse método verifica apenas a temperatura e não confirma se a duração da esterilização foi suficiente, tornando -o o padrão mais básico para a validação de autoclave.

3. Método da sonda de temperatura feita
Princípio: Este método aproveita as características de fusão e recristalização de certos produtos químicos quando expostos ao calor. Ao selar esses produtos químicos dentro de pequenos tubos de vidro e colocá -los na autoclave, a formação de cristal após a esterilização pode indicar se a temperatura necessária foi atingida.

Um reagente comumente usado é o ácido benzóico, que possui um ponto de fusão de 121-123 ° C, correspondendo de perto a temperatura de esterilização necessária. Durante a esterilização, o ácido benzóico sólido é selado em um pequeno tubo de vidro e colocado dentro da autoclave. Após o processo, a estrutura cristalina do ácido benzóico é examinada para determinar se a temperatura necessária foi alcançada.

Como o método do termômetro de ponto fixo, essa abordagem indica apenas a temperatura e não pode confirmar se a duração da esterilização foi suficiente.

4. Método do Indicador Biológico
Princípio: Este método usa esporos não patogênicos de Geobacillus stearothermophilus como organismos indicadores para avaliar a eficácia da esterilização térmica. Esses esporos são altamente resistentes ao calor e têm uma resistência térmica semelhante aos esporos de clostridium botulinum, tornando -os uma referência confiável para avaliar se a autoclave atende aos requisitos de esterilização.

Os indicadores biológicos vêm em três formas:

Suspensões de esporos
Tiras de esporos
Tiras de esporos combinadas com um meio de cultura (tubos indicadores biológicos)
Os indicadores biológicos são normalmente colocados em cinco locais dentro da câmara de esterilização:

Nível inferior: dianteiro, médio e traseiro
Nível superior: centro
Após a esterilização, os indicadores são inoculados em água de peptona roxa-glicose de bromocresol e incubados a 55-60 ° C por 2 a 7 dias:

Se o meio de cultura permanecer claro e inalterado em cores, os esporos foram mortos, indicando esterilização efetiva.
Se o meio ficar amarelo e turbido, os esporos sobreviveram, o que significa que o processo de esterilização foi ineficaz.
O mesmo método de validação se aplica a suspensões de esporos e tiras de esporos.

Muitos laboratórios também usam tubos de indicadores biológicos comerciais, que funcionam de maneira semelhante a suspensões e tiras de esporos. Esses tubos contêm esporos de G. Stearothermophilus, juntamente com uma ampola de vidro de meio de cultura. Após a autoclave, a ampola de vidro dentro do tubo é esmagada para liberar o meio de cultura e o tubo é incubado a 56 ° C, com um controle positivo incluído.

Se a esterilização era ineficaz, esporos viáveis ​​crescerão, girando o caldo amarelo.
Se a esterilização foi bem -sucedida, os esporos são inativados e o caldo permanece roxo.
Frequência de validação de autoclave
Atualmente, não existem padrões regulatórios rigorosos definindo com que frequência os autoclaves devem ser validados. No entanto, os laboratórios devem estabelecer seu próprio cronograma de validação e aderir a isso estritamente a ele.

Para facilitar a operação e validação confiável, são altamente recomendadas fitas indicadoras químicas e tubos indicadores biológicos. Esses métodos são fáceis de usar e fornecem uma avaliação abrangente da eficácia da esterilização.

Considerações importantes para autoclave
(Algumas autoclaves importadas totalmente automatizadas podem não exigir ventilação manual)

Ao usar uma autoclave, é essencial remover o ar frio da câmara enquanto introduz o vapor. A ventilação de escape deve permanecer aberta até que todo o ar frio seja expulso, garantindo uma distribuição uniforme de temperatura dentro.

Se qualquer ar permanecer dentro da câmara, o manômetro poderá indicar a pressão correta, mas a temperatura real será menor que o esperado. Quanto mais ar residual, maior a discrepância, levando a esterilização incompleta.

(Para aqueles que encontram bolhas de ar em pequenos tubos ao esterilizar a mídia baseada em fermentação, tente aumentar a evacuação aérea para melhorar os resultados.)